Antinukleárne protilátky (ANA)

Antinukleárne protilátky sú súčasťou komplexného diagnostického procesu systémových ochorení spojivového tkaniva. Komplexný mechanizmus tvorby antinukleárnych protilátok sťažuje interpretáciu ich výsledkov a prítomnosť alebo neprítomnosť jednotlivých protilátok nie vždy naznačuje chorobný proces. Aké sú typy antinukleárnych protilátok? Kedy by sa mal test vykonať?

Obsah:

1. Antinukleárne protilátky - typy
2. Antinukleárne protilátky - tvorba a mechanizmus účinku
3. Antinukleárne protilátky - indikácie pre štúdiu
4. Antinukleárne protilátky - aký je test?
5. Antinukleárne protilátky - ako interpretovať výsledok?

Anti-nukleárne protilátky (ANA) sú autoprotilátky namierené proti prvkom bunkového jadra, napríklad DNA a cytoplazme. Sú jednou z najrozmanitejších a najštudovanejších protilátok.

Antinukleárne protilátky - typy

• protilátky proti extrahovateľným jadrovým antigénom (anti-ENA):
• proti DNA topoizomeráze I (anti-Scl70)
• proti ribonukleoproteínu (anti-RNP)
• proti Smithovmu antigénu (anti-Sm)
• anti-Mi2 / Mi-2
• anti-Ro (SS-A)
• anti-La
• anti-Jo1
• anti-PM-Scl
• anti-Kn
• protilátky proti nukleárnemu proteínu tvoriacemu póry gp-2010 (anti-gp-210)
• protilátky proti natívnej dvojvláknovej DNA (anti-dsDNA)
• anti-centromerické protilátky (anti-ACA)

Antinukleárne protilátky - tvorba a mechanizmus účinku

Autoimunita je abnormálna reakcia imunitného systému na jeho vlastné tkanivá, ktorá vedie k výskytu autoimunitných chorôb.

Boli opísané rôzne mechanizmy autoimunity, jedným z nich je uvoľňovanie antigénov skrytých pred imunitným systémom, napríklad v dôsledku zápalového poškodenia tkaniva.

Potom sa uvoľnia prvky nachádzajúce sa v bunkovom jadre, napríklad DNA, RNA, históny, ktoré imunitný systém začne rozpoznávať ako niečo cudzie a vytvára proti nim protijadrové protilátky.

Antinukleárne protilátky - indikácie pre štúdiu

• podozrenie na choroby spojivového tkaniva:
• systémový lupus erythematosus (prítomnosť protilátok u 95 - 100% pacientov; protilátky proti dsDNA sú špecifickým markerom ochorenia)
• liekom indukovaný lupus (95 - 100% pacientov)
• antifosfolipidový syndróm (40 - 50% pacientov)
• systémová sklerodermia (80 - 95% pacientov, najmä protilátky anti-Scl70)
• polymyozitída a dermatomyozitída (40-80% pacientov, najmä protilátky proti Jo1 a anti-Mi2)
• Sjögrenov syndróm (48 - 96% pacientov, najmä anti-Ro a anti-La protilátky)
• reumatoidná artritída (asi 10% pacientov)
• juvenilná idiopatická artritída (menej ako 10% pacientov)
• Raynaudov syndróm (20 - 60% pacientov)
• fibromyalgia (15 - 25% pacientov)
• zmiešané ochorenia spojivového tkaniva (95 - 100% pacientov)
• hodnotenie aktivity ochorenia a sledovanie účinnosti liečby, napríklad anti-dsDNA protilátok pri systémovom lupus erythematosus
• koreluje prítomnosť protilátok s výskytom špecifických príznakov ochorenia, napríklad Sjögrenov syndróm a prítomnosť protilátok anti-Ro a anti-La
• predpovedanie choroby v budúcnosti

Antinukleárne protilátky - aký je test?

Na stanovenie antinukleárnych protilátok je krv odobratá z ohybu lakťa nalačno.

Metódy používané na stanovenie protilátok sú veľmi odlišné a závisia od typu meranej antinukleárnej protilátky. Jedná sa hlavne o imunologické metódy ako:

• ELISA
• RIA
• nepriama imunofluorescencia
• metóda dvojitej imunodifúzie
• western blot

V prípade antinukleárnych protilátok sa používa dvojstupňová diagnostika. Najskôr sa vykoná skríningový test pomocou metódy nepriamej imunofluorescencie, ktorá sa vyznačuje vysokou citlivosťou.

Metóda nepriamej imunofluorescencie spočíva v imobilizácii buniek HEp-2 odvodených z ľudských epiteliálnych buniek na mikroskopickom sklíčku.

Bunky tejto línie majú vo svojej cytoplazme a bunkových jadrách antigény, ktoré viažu patologické protilátky z krvi pacienta.

Po pridaní séra pacienta do pohára sa antinukleárne protilátky viažu na špecifické antigény a sú viditeľné pod mikroskopom vďaka špeciálnym fluorescenčným značkám.

Výhodou nepriamej imunofluorescencie je možnosť diferenciácie typov protilátok na základe typu osvetlenia fluorescenčného farbiva.

Napríklad žiarenie jadra homogénneho typu naznačuje prítomnosť anti-dsDNA alebo anti-ssDNA protilátok.

Pozitívny výsledok skríningového testu musí byť vždy potvrdený. Na tento účel sa používajú veľmi špecifické imunologické metódy, napríklad Western blot. Po detekcii prítomnosti a identifikácii typu antinukleárnej protilátky sa stanoví jej titer, to znamená najvyššie zriedenie séra, v ktorom je možné detekovať prítomnosť protilátok.

Antinukleárne protilátky - ako interpretovať výsledok?

Správny titer antinukleárnych protilátok by mal byť nižší ako 1:40.

Ak je skríningový test na antinukleárne protilátky negatívny a neexistujú klinické príznaky, ktoré by naznačovali systémové ochorenie spojivového tkaniva, diagnóza by sa nemala rozširovať o špecifické protilátky, napríklad anti-dsDNA, anti-Sm.

Za klinicky významné titre u dospelých sa považujú ≥ 1: 160 a u detí ≥ 1:40.

V prípade pozitívnych výsledkov sa navrhuje interpretovať výsledok testu takto:

• titer 1: 40–1: 80 - hraničný výsledok (slabo pozitívny), pri absencii klinických príznakov chorôb spojivového tkaniva sa test neodporúča opakovať ani vykonať následný test, pretože výsledky sa u väčšiny ľudí v priebehu rokov nemenia
• titer 1: 160-1: 640 - stredne pozitívny výsledok, pri absencii klinických príznakov chorôb spojivového tkaniva sa odporúča test opakovať po 6 mesiacoch
• titer ≥ 1: 1280 - vysoký pozitívny výsledok, za prítomnosti klinických príznakov ochorení spojivového tkaniva je na diagnostiku ochorenia potrebná ďalšia odborná diagnostika

Je potrebné mať na pamäti, že sérologické testovanie na antinukleárne protilátky je súčasťou komplexného diagnostického procesu a pozitívny výsledok sa musí vždy interpretovať v kontexte klinického obrazu a prítomnosti charakteristických symptómov ochorenia.

Antinukleárne protilátky s nízkym titrom sa nachádzajú u 5% zdravej populácie a ich frekvencia stúpa s vekom.

Ďalej sa ich prítomnosť nachádza vo fyziologických a patofyziologických podmienkach, v ktorých antinukleárne protilátky nemajú diagnostický význam:

• infekcie, napr. tuberkulóza, syfilis, malária
• ochorenie pečene, napríklad cirhóza pečene
• pľúcne choroby, napríklad sarkoidóza, azbestóza
• rakoviny, napríklad leukémia, lymfóm, rakovina prsníka, melanóm
• kožné choroby, napríklad psoriáza, lichen planus
• po transplantácii orgánu, napríklad transplantácii srdca, transplantácii obličky
• užívanie liekov, napr. antiepileptík, hydralazínu, lítnych solí,
• ďalšie autoimunitné choroby, napríklad Hashimotova choroba, Addisonova choroba, cukrovka I. typu
• tehotenstvo (až 20% tehotných žien)

Mali by ste vedieť ...

Etnické variácie charakterizujú vznik rôznych typov antinukleárnych protilátok.

Napríklad u kaukazských pacientov so systémovou sklerózou sú pravdepodobnejšie protilátky anti-ACA a u Afroameričanov a Afričanov sú pravdepodobnejšie protilátky reaktívne s topoizomerázou.

Odporúčaný článok:

Diagnostický test ANA (antinukleárne protilátky)

Literatúra

1. Fischer K. a kol. Autoprotilátky v reumatologickej praxi. Fórum Reumatol. 2016, 2, 1, 39–50.
2. Interné choroby, editoval Szczeklik A., Medycyna Praktyczna Kraków 2010
3. Laboratórna diagnostika s prvkami klinickej biochémie. Príručka pre študentov medicíny, vydaná autormi Dembińska-Kieć A. a Naskalski J.W., Elsevier Urban & Partner Wydawnictwo Wrocław 2009, 3. vydanie

O autorovi

Karolina Karabin, MD, PhD, molekulárna biologička, laboratórna diagnostička, Cambridge Diagnostics Polska. Biologička so špecializáciou na mikrobiológiu a laboratórna diagnostika s viac ako 10-ročnými skúsenosťami v laboratórnej práci. Absolvent Vysokej školy molekulárnej medicíny a člen Poľskej spoločnosti pre genetiku človeka. Vedúci výskumných grantov v Laboratóriu molekulárnej diagnostiky na Katedre hematológie, onkológie a vnútorných chorôb Lekárskej univerzity vo Varšave. Na 1. lekárskej fakulte Lekárskej univerzity vo Varšave obhájila titul doktor lekárskych vied v odbore lekárska biológia. Autor mnohých vedeckých a populárno-vedeckých prác v oblasti laboratórnej diagnostiky, molekulárnej biológie a výživy. Denne ako špecialista v oblasti laboratórnej diagnostiky vedie testovacie oddelenie v spoločnosti Cambridge Diagnostics Polska a spolupracuje s tímom dietológov na CD Dietary Clinic. O svoje praktické poznatky z diagnostiky a dietoterapie chorôb sa delí s odborníkmi na konferenciách, školeniach, v časopisoch a na webových stránkach. Zaujíma ju najmä vplyv moderného životného štýlu na molekulárne procesy v tele.

Prečítajte si viac článkov od tohto autora