Prietoková cytometria je diagnostická a výskumná technika známa už mnoho rokov a široko používaná v onkológii. Prietoková cytometria umožňuje skúmať bunky tvoriace suspenziu v laminárnom alebo stratifikovanom kvapalnom prúde pomocou prístroja nazývaného prietokový cytometer. Aké sú indikácie pre prietokovú cytometriu a ako sa robí?
Prietoková cytometria sa používa pri diagnostike hematologických novotvarov, pretože ide o tekuté nádory, ale je to iba pomocná metóda. Je však potrebné pripomenúť, že existuje jedna rakovina, ktorú je možné diagnostikovať iba touto metódou. Toto je chronická lymfocytová leukémia.
Pri iných neoplastických ochoreniach sa prietoková cytometria používa ako diagnostická pomôcka, pretože vykazuje veľmi dôležité vlastnosti neoplastických buniek. Táto metóda sa tiež používa na hodnotenie účinnosti použitej liečby.
Prietoková cytometria - čo ukazuje?
Prúd kvapaliny obsahujúci testované častice prechádza konštantnou rýchlosťou (100 - 2 000 častíc za sekundu) cez meraciu plochu cytometra. Optické metódy tu analyzujú tvary, rozmery, vnútornú štruktúru buniek a ich obsah, napr. DNA. Všetky bunky sú opticky označené.
Merania sú založené na rozptylových vlastnostiach laserového svetla jednotlivými bunkami alebo ich zložkami (jadrá, chromozómy, mitochondrie) alebo na nimi indukovanej fluorescencii.
Optické signály sa prevádzajú na elektrické signály, ktoré sa po analýze graficky zobrazujú ako mono- alebo biparametrické distribúcie.
Cytometer tiež umožňuje segregáciu častíc po opustení meracej zóny. Dá sa povedať, že prístroj usporiada (segreguje) bunky s rovnakými prvkami (prípravný druh) alebo izoluje určité typy buniek (analytický druh).
Prietoková cytometria umožňuje štúdium populačných charakteristík buniek, analýzu bunkových zložiek (najmä nukleových kyselín, proteínov, povrchových a bunkových antigénov), enzymatickú aktivitu, membránový potenciál, mitochondriálnu aktivitu, intracelulárne pH, transport iónov a membránovú tekutosť.
Prietoková cytometria - aplikácia
Prietoková cytometria použitá v diagnostike umožňuje určiť fenotyp neoplastických buniek a expresiu jednotlivých proteínov. Na dosiahnutie tohto cieľa sa používajú značené fluorescenčné protilátky, ktoré sa charakteristickým spôsobom viažu na antigény na povrchu bunkovej membrány. Vďaka tomu je možné určiť stupeň ich diferenciácie, pôvodu, prognostických a terapeutických markerov, ktoré uľahčujú rozhodovanie o ďalších diagnostických a terapeutických postupoch.
Ďalšou aplikáciou pre prietokovú cytometriu je sledovanie efektívnosti aplikovanej liečby hodnotením tzv „reziduálna choroba“, čo je percento buniek s fenotypmi podobnými nádorom, ktoré po liečbe zostávajú.
Prietoková cytometria tiež uľahčuje výskum rakovinových chorôb. Vďaka tejto metóde je možné hľadať napríklad receptory, ktoré sú na povrchu neoplastických buniek a môžu sa stať cieľmi liečby.
Metóda umožňuje vyhodnotiť aktivitu proteínov vo vnútri bunky. Je tiež možné vyhodnotiť bunkový cyklus, napríklad stanovením množstva DNA v bunke.
V procese proliferácie bunka prechádza bunkovým cyklom cez fázy, v ktorých zdvojnásobuje množstvo DNA. Hodnotením tohto množstva je možné určiť, v ktorej fáze sa bunky nachádzajú, či už proliferujú alebo nie, alebo či prechádzajú do apoptózy. Inými slovami, pomocou prietokovej cytometrie môžete zistiť, či sa bunky pripravujú na apoptózu, programovaný proces smrti.
Prietoková cytometria - budúcnosť
Prietoková cytometria je známa a v medicíne sa používa už niekoľko desaťročí. Neustále sa však zdokonaľuje a vytvára nové diagnostické a výskumné možnosti. V prvom období použitia tejto metódy bolo možné určiť iba veľkosť a stupeň zrnitosti buniek.
Použitie laserového svetla v prístrojoch na prietokovú cytometriu vám umožňuje excitovať určité fluorescenčné markery a potom vyhodnotiť ich emisiu. Moderné cytometre umožňujú výrazné zvýšenie počtu markerov, ktoré sa hodnotia naraz, čo sa definitívne prejaví zvýšením citlivosti tejto metódy.
Preto sa používa nielen na diagnostiku neoplastických ochorení, ale aj na hodnotenie účinnosti liečby.
O autorovi
Prečítajte si viac článkov od tohto autora
